酱油一般以大豆为原料，优化油中添加盐、气相糖等相关辅料，色谱通过制油、法测法发酵等加工工艺所制成的定酱对羟的方食品。其主要特点是基苯甲酸色素含量高，氨基酸含量高，酯类辅料成分种类繁多。含量酱油的优化油中营养丰富、香味独特、气相可口宜人，色谱是法测法家家户户必备的调味品。据相关研究表明，定酱对羟的方2018年，基苯甲酸食用酱油产值约为2.7亿元，酯类总产量约为550万吨。
对羟基苯甲酸酯类通过破坏微生物的细胞膜，使细胞内的蛋白质变性，与抑制微生物细胞的呼吸酶系与电子传递酶系的活性，以达到防腐的作用。在近几年的分析检测中，已经有不少的学者已经对对羟基苯甲酸酯类有了一定的研究，如高元元等，通过气相色谱法同时检测对羟基苯甲酸甲酯与乙酯进行测定，杨杰等，利用Online-GPC-GC-MS测定调味品中对羟基苯甲酸酯类化合物。而本研究直接利用气相色谱分析法进行测定对羟基苯甲酸酯类的4种物质。当目标物在气化室气化后，经过色谱柱的固定相分离，检测器中的信号放大器把收到的信号进行放大，以达到定量的目的。酱油色素含量高、氨基酸含量高，分析的时候杂峰多，从而导致分离难度大，假阳性结果时有发生，从而导致检测结果不准确。因此优化仪器分析条件，提高检测的灵敏度与分离度能有效的解决这些问题。
1、仪器、试剂、标准品与样品仪器：GC-2010Plus岛津气相色谱仪；试剂：氯化钠（分析纯），盐酸（分析纯），乙醚（分析纯），碳酸氢钠（分析纯）；标准品：对羟基苯甲酸甲酯（纯度为99.89%）、对羟基苯甲酸乙酯（纯度为99.9%），对羟基苯甲酸丙酯（纯度为98.7%）与对羟基苯甲酸丁酯为标准物质（纯度为99.5%）；样品：海天酱油（市场购买）。
准确称取对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯与对羟基苯甲酸丁酯的标准品各约25mg（精确至0.1mg），用无水乙醇定容稀释并至25mL，配制成1000μg/mL的储备液。
吸取标准储备液（1.2.1）0.010mL、0.025mL、0.100mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL于一组10mL容量瓶中，用无水乙醇试剂定容，此标准系列的浓度为1.00μg/mL、2.50μg/mL、10.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL。
称取5g试样于250mL分液漏斗中，依次加入10mL饱和氯化钠溶液，1mL50%盐酸酸化，摇匀，分别以75mL、50mL、50mL无水乙醚提取三次，每次2min，放置片刻，弃去水层，合并乙醚层于250mL分液漏斗中，加入10mL饱和氯化钠溶液洗涤一次，再分别以碳酸氢钠溶液30mL、30mL、30mL洗涤三次，弃去水层。用滤纸吸去漏斗颈部水分，将有机层经过无水硫酸钠（约20g）滤入浓缩瓶中，在旋转蒸发仪上浓缩近干，用氮气除去残留溶剂，准确加入2.0mL无水乙醇溶解残留物，供气相色谱用。
采用色谱条件（1.2.4），10μg/mL的混合对羟基苯甲酸酯类标准溶液的谱图如图1。
（1）色谱柱的确定
对羟基苯甲酸酯类具有酚羟基结构，因此本实验选择InertCap1，InertCap5，InertCap1301，InertCap17与InertCapWAX在柱温箱为100℃，标液浓度均为50μg/mL的条件下进行测试，结果谱图如2～6。
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相关链接：羟基苯甲酸甲酯，羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸乙酯，碳酸氢钠
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